Системы формирования изображений Odyssey от Li-Cor Biotechnology обладают следующими основными преимуществами:

• Количественная обработка вестерн-блотов;
• Высокая чувствительность;
• Широкий линейный динамический диапазон;
• Без использования пленки и без работы в фотолаборатории;
• Широкий спектр приложений.

Количественная обработка вестерн-блотов

Точность и линейность инфракрасного флуоресцентного детектирования обеспечивает достоверность различий экспрессии белков, гарантируя высокую чувствительность. Инфракрасная лазерная технология обеспечивает наилучшее детектирование при оптимальной длине волны. Системы Li-Cor Odyssey характеризуются широким линейным динамическим диапазоном. Благодаря этому обеспечивается точная детекция как интенсивных, так и слабых полос на блотах, без неопределенности и неудобств работы с множественными выдержками. Вся процедура проводится без использования пленки и без работы в фотолаборатории, благодаря чему обеспечивается экономия финансов и ценного времени, необходимых для работы с пленкой и фотокомнатой. Отпадает необходимость в дополнительных экспериментах, связанных с устранением “погасших” полос и необходимостью во множественных выдержках.

Основные приложения систем Li-Cor Odyssey

Высокочувствительный количественный анализ вестерн-блотов, анализ клеточных вестернов (In-Cell Western), анализ гели с окрашиванием по Кумасси, гелей ДНК, анализ флуоресцентных гель-сдвигов, получение изображений тканей, получение изображений в живом организме, получение изображений целых органов.

Семейство систем формирования инфракрасных изображений Odyssey

ODYSSEY CLx – наиболее мощная и чувствительная
ODYSSEY Sa – гибкая персональная
ODYSSEY Fc – наиболее универсальная

Преимущества инфракрасной флуоресценции с помощью систем Odyssey

Компания LI-COR более десяти лет назад начала работу с вестерн-блотами. Инфракрасное детектирование имеет целый ряд преимуществ при пользовании с соответствующими флуоресцентно-мечеными вторичными антителами с ИК-метками. Точный количественный анализ и широкий линейный динамический диапазон недоступны при работе с традиционными хемилюминесцентными методами. Двухцветное мечение позволяет проводить детектирование двух мишеней одновременно на одной и той же мембране для увеличения точности количественного определения. Детекция проводится при 700 и 800 нм. В этой области значительно снижается аутофлуоресценция и рассеяние света по сравнению с видимой областью. Инфракрасные красители обеспечивают улучшенную стабильность сигнала, что позволяет раз за разом получать точные и отлично воспроизводимые данные, не зависящие от времени – данные не ограничены временем ферментативной реакции. Блоты можно проанализировать заново при необходимости через недели и месяцы. В настоящее время уже тысячи опубликованы тысячи научных работ с данными, полученными с помощью системы формирования изображений Odyssey. ИК-детекция позволяет надежно детектировать малые количества образцов, такие как 1,2 пг человеческого трансферрина, тогда как с помощью хемилюминесценции детектируется 4,9 пг. Чувствительность инфракрасного флуоресцентного детектирования до 200 раз больше, чем у других методов с видимыми флуорофорами (Cy3, Cy5 или FITC). При этом интенсивность аутофлуоресценции мембраны значительно снижена.

Возбуждение флуоресценции мишеней с помощью ИК-лазеров

Применение ИК-лазеров дало возможность существенно улучшить надежность, воспроизводимость и производительность детекции. ИК лазер выдает свет возбуждения в существенно более узком диапазоне длин волн по сравнению со светодиодами или источниками белого света. Благодаря этому исключается интерференция, увеличивающая уровень фона. Технология фильтрации LI-COR значительно снижает утечку света возбуждения, что уменьшает фон изображения и повышает чувствительность детектирования низкоинтенсивных мишеней. Лазерная технология LI-COR обеспечивает превосходный уровень детектирования при оптимальных длинах волн. По сравнению с другими приборами использование инфракрасной флуоресценции с каналами 700 и 800 нм в приборах серии Odyssey является наиболее выигрышным.

Чувствительность

Все системы Odyssey используют инфракрасное лазерное возбуждение флуоресценции, по своим характеристикам значительно превосходящее системы, основанные на светодиодах и на видимом свете.
Биологические материалы, мембраны и пластмассы дают высокий фон из-за рассеяния света и аутофлюоресценции в видимом диапазоне волн, используемом в большинстве флюоресцентных устройств формирования изображений. Это ограничивает чувствительность использующих видимый свет флюоресцентных систем и делает затруднительным обнаружение эндогенных уровней редких белков без насыщения более интенсивных полос на блотах. Это с вою очередь исключает корректный количественный анализ вестерн-блотов. Возбуждение ИК-лазером дает как существенно более выигрышное отношение сигнал-шум, так и намного лучшую чувствительность детекции. ИК-лазеры обеспечивают высокоскоростное детектирование с увеличенной чувствительностью по сравнению с системами, использующими светодиоды или видимый белый свет. Благодаря этому изображения получаются исключительно четкими, несравнимыми с другими цифровыми системами формирования изображений.

Количественная обработка вестерн-блотов

Цифровая технология формирования изображений LI-COR проявляет свои наилучшие качества при количественной обработке вестерн-блотов. Все системы формирования изображений LI-COR Odyssey обеспечивают количественную обработку данных в максимально широком динамическом диапазоне. Детектирование с помощью пленки характеризуется рядом известных проблем, которые исключаются переходом от пленки на метод детектирования, использующий инфракрасную флюоресцентную технологию. Динамизм традиционной хемилюминесцентной детекции с использованием пленки позволяет получать только моментальные снимки ферментативной реакции. Этот процесс очень сильно зависит от временной выдержки и экспозиции, что ограничивает линейный диапазон и фактически дает возможность получать количественные результаты лишь частично.
С другой стороны при использовании ИК флуоресцентного метода пленка и ферментативный процесс заменяются инфракрасными флуоресцентно-мечеными антителами. Точность и линейность технологии формирования изображений LI-COR Odyssey великолепна и дает полную уверенность в дифференциации даже похожих белков. Получаемые данным методом инфракрасные флуоресцентные блоты могут сохраняться сколь угодно долго. Затем (даже через несколько месяцев или лет) при необходимости по ним снова могут быть сформированы изображения и затем эти изображения могут быть количественно обработаны. В тестовых экспериментах нижний предел обнаружения сохраняется в ИК вестерн-блоте с отношением сигнал-шум выше 5 для всех точек данных, даже после хранения в течение 18 месяцев. В случае же хемилюминесцентного детектирования уже через 60 минут как правило отношение сигнал-шум падает до 1 из-за угасания сигнала.

Благодаря использованию инфракрасных флуоресцентно-меченых антител, вместо ферментативной реакции все системы инфракрасного формирования изображений Odyssey имеют максимально широкий линейный динамический диапазон, что позволяет проводить точное количественное определение как высокоинтенсивных так и слабых полос на одном и том же вестерн-блоте. Дополнительная информация по динамическому диапазону приведена в таблицах технических характеристиках.

Широкий динамический диапазон

Благодаря инновационному использованию инфракрасных флуоресцентных коньюгатов антител системы формирования изображений Odyssey обеспечивают максимально широкий линейный динамический диапазон. Это позволяет точно детектировать интенсивные и слабые полосы на одном и том же вестерн-блоте. В противоположность этому, динамическая ферментативная природа хемилюминесценции позволяет собирать только моментальные «снимки» протекающего ферментативного процесса, и этот процесс сильно зависит от временной выдержки и экспозиции, что ограничивает линейный диапазон и предоставляет лишь частично количественные результаты.

Мультиплексное детектирование

Семейство устройств формирования изображений Odyssey обеспечивает одновременный двухцветный анализ мишеней с каналами ИК флуоресцентного детектирования 700 нм и 800 нм. Двухцветный анализ вестерн-блотов облегчает нормализацию благодаря использованию одного канала для нормализации. При этом также устраняются ошибки, вызванные страйпингом и повторным зондированием, или сравнением различных блотов. Превосходная четкость и детальность изображения упрощают детектирование незначительных сдвигов подвижности, например вызванных такими модификациями белков как фосфорилирование. Наложение красного и зеленого сигналов отображаются желтым цветом. Таким образом фактически возможна даже детекция белков с одинаковой подвижностью на одном блоте.

Приложения систем семейства Odyssey

Приложения, поддерживаемые технологией формирования изображений, реализованной в семействе приборов Odyssey. Технология формирования изображений Odyssey предоставляет исследователям инструменты, необходимые для получения четких и высококачественных данных в самых разных приложениях.

Инфракрасные красители и антитела IRDye

Инфракрасные красители обеспечивают ключевое преимущество систем формирования изображений в приборах семейства Odyssey. Семейство инфракрасных красителей IRDye от LI-COR синтезировано со специальными реакционноспособными функциональными группами, обеспечивающими ковалентное связывание с антителами и другими биомолекулами. Инфракрасно окрашенные вторичные антитела IRDye и конъюгаты оптимизированы для широкого диапазона приложений. Для заказ доступен широкий выбор антител.

Анализ клеточных вестернов (In-Cell Western)

Анализ клеточных вестернов (In-Cell Western) выполняется в формате многолуночных микропланшетов. При этом специфичные к мишеням первичные антитела и инфракрасно-меченые вторичные антитела используются для детектирования целевых белков в клетках и флуоресцентный сигнал от каждой лунки измеряется количественно. Благодаря ИК-флуоресцентной технологии детекции точность результатов повышается и данные становятся более значимыми. Одновременное двухцветное детектирование обеспечивает точное количественное определение и точное измерение количества обеих мишеней и их соотношения за счет нормализации по одной из мишеней. Прямое определение белков непосредственно в клетках устраняет вариабельность и артефакты, вызванные клеточным лизисом. Внутриклеточное детектирование предоставляет более релевантные результаты чем ферментный анализ с предварительно очищенными белками. Инфракрасно-меченые конъюгаты стабильно обеспечивают максимально высокую чувствительность для измерения минимальных изменений в количестве или модификации белка.
Анализ множественных мишеней возможен на 96- или 384-луночных планшетах. Быстрый анализ с использованием микропланшет позволяет устранить операции подготовки лизата, загрузки геля, электрофореза и переноса мембраны. Метод идеален для скрининга обработанных клеток, например в случае поиска химических соединений, оказывающих необходимый эффект на белки-мишени.

Сравнительные технические характеристики систем формирования изображений Odyssey

Фактически системы семейства Odyssey – это совершенные инструменты для точного количественного анализа вестерн-блотов. Приборы семейства Odyssey характеризуются надежностью, простотой в использовании и гарантированно дают на выходе точные, надежные и воспроизводимые результаты. Системы Odyssey являются комплексным продуктом: взаимооптимизированные прибор, реагенты и программное обеспечение.

Система Odyssey CLx является системой последнего поколения и основана на системе Odyssey Classic, которая снискала стопроцентное доверие пользователей и фактически стала стандартом в технологии количественной работы с вестерн-блотами.

Система Odyssey CLx является наиболее гибкой и многофункциональной среди всего семейства формирования изображений Odyssey, подходит для различных приложений.

Система Odyssey CLx предоставляет возможность работать с максимально широким диапазоном приложений.
Система Odyssey CLx предоставляет самую большую поверхность изображения среди всех систем формирования изображений семейства Odyssey (25 см x 25 см). Такая площадь вмещает до шести микротитровальных плашек.

Техническая реализация системы
Система Odyssey CLx имеет два независимых инфракрасных канала детектирования: два отдельных лазера и два детектора одновременно детектируют два флуоресцентных сигнала (700 и 800 нм). Оптическая система использует светодиодные лазеры и полупроводниковые детекторы с продолжительным сроком службы и очень низкими требованиями к техническому обслуживанию. Лучи полупроводниковых лазеров 700 нм и 800 нм фокусируются для формирования точек возбуждения на поверхности объекта сканирования. Объектив микроскопа, сфокусированный на точке возбуждения, собирает свет от обоих флуоресцирующих инфракрасных красителей. Свет от объектива микроскопа пропускается через дихроическое зеркало, которое расщепляет свет на два флуоресцентных сигнала. Флуоресцентные сигналы проходят по независимым оптическим пути и фокусируются на отдельных кремниевых светодиодах, после чего детектируются. Изображение 700 нм (красное) и 800 нм (зеленое) формируются одновременно за одно сканирование, и могут быть отображены отдельно или вместе в одном изображении.

Системы Odyssey благодаря методу возбуждения флуоресценции инфракрасным лазером превосходят системы, использующие обычный белый видимый свет. Благодаря более интенсивному и избирательному свету для возбуждения. В ассортименте LI_COR присутствует ряд флуоресцентных красителей, совместимых с длинами волн возбуждения 700 нм и 800 нм. Спектральное наложение минимизировано за счет 100 нм разделения двух каналов детектирования, при этом оптическая фильтрация гарантирует, что каждый детектор измеряет интенсивность только от одного инфракрасного красителя.

Функциональность

Функция AutoScan: широкий динамический диапазон позволяет без насыщения собирать весь диапазон данных за одиночный быстрый проход сканирования – нет необходимости во множественном сканировании для оптимизации параметров интенсивности. Еще более высокий динамический диапазон доступен при детектировании протеинов с высоким содержанием в одиночном изображении. Множественные блоты и сканирование плашек: одновременное сканирование множественных образцов с различными интенсивностями за один проход сканирования. Система Odyssey CLx оснащается простой в использовании программой создания изображений Image Studio. Получение изображения возможно фактически путем нажатия одной кнопки. Интуитивный программный интерфейс позволяет экономить время, необходимое как на получение, так и анализ данных.

Сферы применения системы Odyssey CLx

• Вестерн-блоты: двухцветные инфракрасные и гелевые
• Клеточные определения: вестерны In-Cell Western и On-Cell Western Детектирование белков: анализ гелей с окрашиванием по Кумасси, мембраны и слайд-массивы
• Получение изображений: малые животные (в живом организме In Vivo), целые органы, тканевые срезы. Детектирование нуклеиновых кислот: определение сдвигов мобильности, окрашенные ДНК-гели (Syto 60) и массивы
• Эксперименты на микропланшетах: ELISA/FLISA, белковые массивы, анализ РНКi

Устройство для формирования изображений MousePOD
Дополнительный модуль MousePOD может быть опционно размещен на поверхности сканирования системы Odyssey CLx. Модуль MousePOD вмещает до трех мышей или одну крысу. Модуль MousePOD обеспечивает газовую анестезию для животных через носовой конус (система анестезии при необходимости приобретается дополнительно). Модуль MousePOD обеспечивает регулирование температуры воздуха для поддержки температуры животных во время сканирования. Модуль формирования изображений программы Image Studio позволяет быстро маркировать опухоли, органы и другие изучаемые области.

Спецификации системы ODYSSEY CLx

Инфракрасная система формирования изображений Odyssey Sa позволяет реализовать разнообразные схемы экспериментов и работать со многими популярными приложениями, доступных для других более мощных систем из семейства инфракрасных систем формирования изображений LI-COR Odyssey. Система Odyssey Sa является экономичным вариантом, позволяющим всем использовать в своих лабораториях преимущества инфракрасного флуоресцентного детектирования. Система Odyssey Sa использует ту же самую проверенную инфракрасную технологию, которая реализована в топовых моделях семейства Odyssey.

Инфракрасная система формирования изображений Odyssey Sa может работать как с микропланшетами так и с вестерн-блотами. За счет использования двухцветного одновременного детектирования система Odyssey Sa позволяет выполнять одновременно количественный анализ вестерн-блотов по двум мишеням. Это упрощает нормализацию и устраняет ошибки, вызванные страйпингом и повторным зондированием, или сравнением различных блотов.

Система Odyssey Sa является экономным выбором, позволяющим всем использовать преимущества инфракрасной флуоресцентной технологии.
Имеется возможность автоматизации для анализа микропланшет для высокопроизводительных лабораториях.

Техническая реализация системы

Лучи полупроводниковых лазеров 700 нм и 800 нм фокусируются для формирования точек возбуждения на поверхности сканирования. Объектив микроскопа, сфокусированный на точке возбуждения, собирает свет от обоих флуоресцирующих инфракрасных красителей. Свет от объектива микроскопа пропускается через дихроическое зеркало, которое расщепляет свет на два флуоресцентных сигнала. Флуоресцентные сигналы проходят по двум различным оптическим путям и фокусируются на отдельных кремниевых светодиодах, после чего детектируются. Изображение 700 нм (красное) и 800 нм (зеленое) формируются одновременно за одно сканирование, и могут быть отображены отдельно или вместе в одном изображении.

Применения системы формирования изображений Odyssey Sa

• Вестерн-блоты: двухцветные инфракрасные и гелевые
• Клеточные определения: вестерны In-Cell Western и On-Cell Western
• Детектирование белков: гели с окрашиванием по Кумасси, мембраны и слайд-массивы
• Гистология: получение изображений тканевых срезов
• Детектирование нуклеиновых кислот: окрашивание геля ДНК (Syto 60) и массивы НК
• Эксперименты на микропланшетах: ELISA/FLISA, массивы белков, анализ РНКi

Автоматизация

Система Odyssey Sa может быть сконфигурирована для работы с дополнительной автоматизированной системой укладки микропланшет BioTek BioStack производства BioTek.
Система Odyssey Sa создана совместимой с автоматизированной системой укладки микропланшет BioTek BioStack. Система BioStack доступна в 30- или 50-луночных конфигурациях при работе совместно с системой Odyssey Sa и программой Image Studio для автоматизированного считывания сигналов с микропланшетов. Система Odyssey Sa также может быть опционно сконфигурирована для работы со считывателем штрих-кодов. Системы BioTek приобретаются дополнительно.
 

Спецификации системы ODYSSEY Sa

Система формирования изображений Odyssey Fc – это универсальная система визуализации для любых лабораторий. Система Odyssey Fc - это экономичная система, способная работать в двух режимах: как в режиме детекции методом традиционной хемилюминесценции, так и с инфракрасными изображениями.
Благодаря двухцветной количественной ИК-технологии количественного анализа вестерн-блотов и уникальным специализированным реагентам за последние 10 лет компания LI-COR произвела революцию в анализе вестерн-блотов. В системе Odyssey Fc технология анализа вестерн-блотов реализована с опорой на этот опыт. В системе Odyssey Fc весь опыт и история хемилюминесценции скомбинирована с мощью и чувствительностью оптической системы LI-COR FieldBrite XT. Это позволило создать уникальную единую систему, в которой возможна детекция и формирования изображений как по методу хемилюминесценции, так и по технологии инфракрасного флуоресцентного формирования изображений. Система Odyssey Fc, использующая патентованную оптическую технологию FieldBrite XT, предоставляет следующие возможности:

• Получение изображения нажатием одной кнопки;
• Нет необходимости в множественных экспозициях;
• Нет “угасания” полос или насыщения;
• Нет необходимости в последующей программной обработке изображений;
• Существенная экономия расходов на пленку и на содержание фотолаборатории;
• Количественный инфракрасный флуоресцентный анализ;
• Прецизионный количественный анализ результатов;
• Более 6 порядков динамического диапазона.

Система формирования изображений Odyssey Fc – это единственная основанная на лазере система из представленных на рынке, которая также включает преимущества хемилюминесценции.

Система характеризуется превосходной чувствительностью при видимой флуоресцентной детекции. Детектирование нуклеиновых кислот: этидиум бромид и семейство красителей ДНК SYBR для создания цифровых изображений на агарозных гелях.

Не используется вредное УФ-возбуждение – система Odyssey Fc является более безопасной альтернативой для даунстрим-приложений работы с ДНК.

Система Odyssey Fc является экономичным выбором для пользователей, работающих как с традиционными хемилюминесцентными, так и ИК флуоресцентными технологиями создания изображений.

Оптическая система FieldBrite XT

Сердцем системы Odyssey Fc является патентованная LI-COR оптическая система FieldBrite XT. Конструкция система FieldBrite XT предусматривает сочетание камеры с CCD-датчиком и ИК-лазеров (700 и 800 нм), что гарантирует высочайшую чувствительность. Благодаря оптической системе FieldBrite XT система формирования изображений Odyssey Fc является наиболее чувствительной из представленных на рынке.
Преимущества оптической системы FieldBrite XT включают:

• Устранение необходимости “накопления” изображений
• Устранение ошибок связанных с насыщением.
• Пользователь определяет только общее время сбора данных перед снятием одного-единственного изображения.
• Обеспечение однородности в рамках всего поля зрения с коэффициентом варьирования менее 3%.
• Равномерное лазерное освещение обеспечивает формирование изображения с высокой степенью однородности без дополнительной программной обработки.
• Обеспечение оптимизированного разрешения и чувствительности для высокой производительности и высокого качества изображений с низким уровнем фона.
• При детектировании с помощью системы Odyssey Fc уменьшается гашение более интенсивных полос, что повышает разрешение по сравнению с традиционным хемилюминесцентным детектированием.
• Технология FieldBrite XT гарантирует однородность освещения образца, низкий коэффициент варьируемости (%CV) и исключительную воспроизводимость.

Основные применения системы Odyssey Fc

• Анализ вестерн-блотов: хемилюминесценция, двухцветный инфракрасный и гелиевый;
• Детектирование белков: Гели с окрашиванием по Кумасси;
• Детектирование нуклеиновых кислот: окрашивание геля ДНК (EtBr, семейство SYBR® и Syto® 60).

Спецификации системы ODYSSEY Fc

Image Studio является чрезвычайно простой и легкой в использовании программой формирования изображений. Эта программа совместима с системами формирования изображений Odyssey CLx, Odyssey Classic, Odyssey Fc, Odyssey Sa, Odyssey Sa Express, Aerius и Pearl. Простота в освоении и использовании позволяет максимально быстро проводить обучение новых пользователей. Программа имеет интуитивный управляемый ленточный интерфейс. В Image Studio на ленте отображаются инструменты анализа и форматирования, доступные для выбора пользователем.

Программа поддерживает до девяти различных видов анализа, включая вестерн-блоты, документирование геля ДНК, получение изображений малых животных и другие.

Благодаря функции лабораторный журнал есть возможность легко создавать электронные или бумажные лабораторные отчеты, полностью настроенные согласно пожеланиям пользователя и под конкретные задачи. Возможна разработка множественных пользовательских шаблонов с использованием основанного на списках подхода для упорядочивания контента. Для форматирования ваших данных и составления пользовательского отчета просто выбирается нужный шаблон. Если необходимо сформировать отчет в соответствии с требованиями документирования GLP или ISO, есть возможность быстро переформатировать отчет или добавить в него информацию.

Система блоттинга LI-COR MPX идеальна для использования со всем семейством устройств формирования изображений Odyssey. Эта система может использоваться практически для всех процедур работы с вестерн-блотами, в которых используются мембраны из PVDF или нитроцеллюлозы (7 x 8,5 см). Канальные порты с низким объемом (вплоть до 160 мкл) сберегают антитела и снижают расходы. Двадцать четыре канальных порта удобно расположены в шахматном порядке и имеют скошенную кромку, что позволяет эффективно организовать работу с использованием стандартных или многоканальных пипеток. При двухцветном детектировании с системами семейства Odyssey возможно размещение сорока восьми мишеней на одной мембране. Система блоттинга MPX совместима с многими заранее отлитыми в одиночные лунки гелями.Возможности системы блоттинга LI-COR MPX:

• Скрининг одиночного образца и множественных мишеней в одном и том же блоте;
• Скрининг вплоть до 48 мишеней с двухцветными устройствами формирования изображений семейства Odyssey;
• Экономия антител и реагентов.