Информацияо компании
(495) 194-32-54
+7 (495)  
Типография в Москве
Главная  →  Системы визуализации изображений Li-Cor Biotechnology  →  Системы формирования изображений Odyssey, Li-Cor Biotechnology

Системы формирования изображений Odyssey, Li-Cor Biotechnology

Системы формирования изображений Odyssey от Li-Cor Biotechnology обладают следующими основными преимуществами:

  • Количественная обработка вестерн-блотов;
  • Высокая чувствительность;
  • Широкий линейный динамический диапазон;
  • Без использования пленки и без работы в фотолаборатории;
  • Широкий спектр приложений.

Количественная обработка вестерн-блотов

Точность и линейность инфракрасного флуоресцентного детектирования обеспечивает достоверность различий экспрессии белков, гарантируя высокую чувствительность. Инфракрасная лазерная технология обеспечивает наилучшее детектирование при оптимальной длине волны. Системы Li-Cor Odyssey характеризуются широким линейным динамическим диапазоном. Благодаря этому обеспечивается точная детекция как интенсивных, так и слабых полос на блотах, без неопределенности и неудобств работы с множественными выдержками. Вся процедура проводится без использования пленки и без работы в фотолаборатории, благодаря чему обеспечивается экономия финансов и ценного времени, необходимых для работы с пленкой и фотокомнатой. Отпадает необходимость в дополнительных экспериментах, связанных с устранением “погасших” полос и необходимостью во множественных выдержках.

Основные приложения систем Li-Cor Odyssey

Высокочувствительный количественный анализ вестерн-блотов, анализ клеточных вестернов (In-Cell Western), анализ гели с окрашиванием по Кумасси, гелей ДНК, анализ флуоресцентных гель-сдвигов, получение изображений тканей, получение изображений в живом организме, получение изображений целых органов.

Семейство систем формирования инфракрасных изображений Odyssey

ODYSSEY CLx – наиболее мощная и чувствительная
ODYSSEY Sa – гибкая персональная
ODYSSEY Fc – наиболее универсальная

Преимущества инфракрасной флуоресценции с помощью систем Odyssey

Компания LI-COR более десяти лет назад начала работу с вестерн-блотами. Инфракрасное детектирование имеет целый ряд преимуществ при пользовании с соответствующими флуоресцентно-мечеными вторичными антителами с ИК-метками. Точный количественный анализ и широкий линейный динамический диапазон недоступны при работе с традиционными хемилюминесцентными методами. Двухцветное мечение позволяет проводить детектирование двух мишеней одновременно на одной и той же мембране для увеличения точности количественного определения. Детекция проводится при 700 и 800 нм. В этой области значительно снижается аутофлуоресценция и рассеяние света по сравнению с видимой областью. Инфракрасные красители обеспечивают улучшенную стабильность сигнала, что позволяет раз за разом получать точные и отлично воспроизводимые данные, не зависящие от времени – данные не ограничены временем ферментативной реакции. Блоты можно проанализировать заново при необходимости через недели и месяцы. В настоящее время уже тысячи опубликованы тысячи научных работ с данными, полученными с помощью системы формирования изображений Odyssey. ИК-детекция позволяет надежно детектировать малые количества образцов, такие как 1,2 пг человеческого трансферрина, тогда как с помощью хемилюминесценции детектируется 4,9 пг. Чувствительность инфракрасного флуоресцентного детектирования до 200 раз больше, чем у других методов с видимыми флуорофорами (Cy3, Cy5 или FITC). При этом интенсивность аутофлуоресценции мембраны значительно снижена.

Возбуждение флуоресценции мишеней с помощью ИК-лазеров

Применение ИК-лазеров дало возможность существенно улучшить надежность, воспроизводимость и производительность детекции. ИК лазер выдает свет возбуждения в существенно более узком диапазоне длин волн по сравнению со светодиодами или источниками белого света. Благодаря этому исключается интерференция, увеличивающая уровень фона. Технология фильтрации LI-COR значительно снижает утечку света возбуждения, что уменьшает фон изображения и повышает чувствительность детектирования низкоинтенсивных мишеней. Лазерная технология LI-COR обеспечивает превосходный уровень детектирования при оптимальных длинах волн. По сравнению с другими приборами использование инфракрасной флуоресценции с каналами 700 и 800 нм в приборах серии Odyssey является наиболее выигрышным.

Чувствительность

Все системы Odyssey используют инфракрасное лазерное возбуждение флуоресценции, по своим характеристикам значительно превосходящее системы, основанные на светодиодах и на видимом свете.
Биологические материалы, мембраны и пластмассы дают высокий фон из-за рассеяния света и аутофлюоресценции в видимом диапазоне волн, используемом в большинстве флюоресцентных устройств формирования изображений. Это ограничивает чувствительность использующих видимый свет флюоресцентных систем и делает затруднительным обнаружение эндогенных уровней редких белков без насыщения более интенсивных полос на блотах. Это с вою очередь исключает корректный количественный анализ вестерн-блотов. Возбуждение ИК-лазером дает как существенно более выигрышное отношение сигнал-шум, так и намного лучшую чувствительность детекции. ИК-лазеры обеспечивают высокоскоростное детектирование с увеличенной чувствительностью по сравнению с системами, использующими светодиоды или видимый белый свет. Благодаря этому изображения получаются исключительно четкими, несравнимыми с другими цифровыми системами формирования изображений.

Количественная обработка вестерн-блотов

Цифровая технология формирования изображений LI-COR проявляет свои наилучшие качества при количественной обработке вестерн-блотов. Все системы формирования изображений LI-COR Odyssey обеспечивают количественную обработку данных в максимально широком динамическом диапазоне. Детектирование с помощью пленки характеризуется рядом известных проблем, которые исключаются переходом от пленки на метод детектирования, использующий инфракрасную флюоресцентную технологию. Динамизм традиционной хемилюминесцентной детекции с использованием пленки позволяет получать только моментальные снимки ферментативной реакции. Этот процесс очень сильно зависит от временной выдержки и экспозиции, что ограничивает линейный диапазон и фактически дает возможность получать количественные результаты лишь частично.
С другой стороны при использовании ИК флуоресцентного метода пленка и ферментативный процесс заменяются инфракрасными флуоресцентно-мечеными антителами. Точность и линейность технологии формирования изображений LI-COR Odyssey великолепна и дает полную уверенность в дифференциации даже похожих белков. Получаемые данным методом инфракрасные флуоресцентные блоты могут сохраняться сколь угодно долго. Затем (даже через несколько месяцев или лет) при необходимости по ним снова могут быть сформированы изображения и затем эти изображения могут быть количественно обработаны. В тестовых экспериментах нижний предел обнаружения сохраняется в ИК вестерн-блоте с отношением сигнал-шум выше 5 для всех точек данных, даже после хранения в течение 18 месяцев. В случае же хемилюминесцентного детектирования уже через 60 минут как правило отношение сигнал-шум падает до 1 из-за угасания сигнала.

Благодаря использованию инфракрасных флуоресцентно-меченых антител, вместо ферментативной реакции все системы инфракрасного формирования изображений Odyssey имеют максимально широкий линейный динамический диапазон, что позволяет проводить точное количественное определение как высокоинтенсивных так и слабых полос на одном и том же вестерн-блоте. Дополнительная информация по динамическому диапазону приведена в таблицах технических характеристиках.

Широкий динамический диапазон

Благодаря инновационному использованию инфракрасных флуоресцентных коньюгатов антител системы формирования изображений Odyssey обеспечивают максимально широкий линейный динамический диапазон. Это позволяет точно детектировать интенсивные и слабые полосы на одном и том же вестерн-блоте. В противоположность этому, динамическая ферментативная природа хемилюминесценции позволяет собирать только моментальные «снимки» протекающего ферментативного процесса, и этот процесс сильно зависит от временной выдержки и экспозиции, что ограничивает линейный диапазон и предоставляет лишь частично количественные результаты.

Мультиплексное детектирование

Семейство устройств формирования изображений Odyssey обеспечивает одновременный двухцветный анализ мишеней с каналами ИК флуоресцентного детектирования 700 нм и 800 нм. Двухцветный анализ вестерн-блотов облегчает нормализацию благодаря использованию одного канала для нормализации. При этом также устраняются ошибки, вызванные страйпингом и повторным зондированием, или сравнением различных блотов. Превосходная четкость и детальность изображения упрощают детектирование незначительных сдвигов подвижности, например вызванных такими модификациями белков как фосфорилирование. Наложение красного и зеленого сигналов отображаются желтым цветом. Таким образом фактически возможна даже детекция белков с одинаковой подвижностью на одном блоте.

Приложения систем семейства Odyssey

Приложения, поддерживаемые технологией формирования изображений, реализованной в семействе приборов Odyssey. Технология формирования изображений Odyssey предоставляет исследователям инструменты, необходимые для получения четких и высококачественных данных в самых разных приложениях.

Тип системы /

приложение

ODYSSEY CLx

Самые гибкие из всех систем Odyssey

ODYSSEY Sa

Экономичная система формирования инфракрасных изображений для любых лабораторий

ODYSSEY Fc

Экономичная система, способная работать в двух режимах: с хемилюминесцентными и инфракрасными изображениями

Инфракрасные вестерн-блоты

+

+

+

Определение хемилюминесценции

-

-

+

Гели с окрашиванием по Кумасси

+

+

+

Гели ДНК

+

+

+

Syto 60

+

+

+

Этидиум бромид

-

-

+

Семейство SYBR®

-

-

+

Анализ клеточных вестернов (In-Cell Western™)

+

+

-

Анализ On-Cell вестернов

+

+

-

Массивы белков

+

+

-

EMSA

+

-

-

Получение изображений тканевых срезов

+

+

-

Получение изображений целых органов

+

-

-

Получение изображений малых животных

+

-

-

ELISA

+

+

-

Инфракрасные красители и антитела IRDye

Инфракрасные красители обеспечивают ключевое преимущество систем формирования изображений в приборах семейства Odyssey. Семейство инфракрасных красителей IRDye от LI-COR синтезировано со специальными реакционноспособными функциональными группами, обеспечивающими ковалентное связывание с антителами и другими биомолекулами. Инфракрасно окрашенные вторичные антитела IRDye и конъюгаты оптимизированы для широкого диапазона приложений. Для заказ доступен широкий выбор антител.

Анализ клеточных вестернов (In-Cell Western)

Анализ клеточных вестернов (In-Cell Western) выполняется в формате многолуночных микропланшетов. При этом специфичные к мишеням первичные антитела и инфракрасно-меченые вторичные антитела используются для детектирования целевых белков в клетках и флуоресцентный сигнал от каждой лунки измеряется количественно. Благодаря ИК-флуоресцентной технологии детекции точность результатов повышается и данные становятся более значимыми. Одновременное двухцветное детектирование обеспечивает точное количественное определение и точное измерение количества обеих мишеней и их соотношения за счет нормализации по одной из мишеней. Прямое определение белков непосредственно в клетках устраняет вариабельность и артефакты, вызванные клеточным лизисом. Внутриклеточное детектирование предоставляет более релевантные результаты чем ферментный анализ с предварительно очищенными белками. Инфракрасно-меченые конъюгаты стабильно обеспечивают максимально высокую чувствительность для измерения минимальных изменений в количестве или модификации белка.
Анализ множественных мишеней возможен на 96- или 384-луночных планшетах. Быстрый анализ с использованием микропланшет позволяет устранить операции подготовки лизата, загрузки геля, электрофореза и переноса мембраны. Метод идеален для скрининга обработанных клеток, например в случае поиска химических соединений, оказывающих необходимый эффект на белки-мишени.

Сравнительные технические характеристики систем формирования изображений Odyssey

Тип системы

ODYSSEY CLx

ODYSSEY Sa

ODYSSEY Fc

Описание

Самая гибкая и мощная из всех систем Odyssey

Экономичная система формирования инфракрасных изображений для любых лабораторий

Универсальная система, способная работать в двух режимах: с хемилюминесцентными и инфракрасными изображениями

Максимальная область сканирования

25 см x 25 см

7 см x 11 см

10 см x 12 см

Разрешение

21-337 мкм

20-500 мкм

125 мкм

Источник возбуждения

Точечный лазер

Точечный лазер

Освещение области

Метод определения

Лавинный фотодиод

Лавинный фотодиод

CCD

Динамический диапазон

4 порядка (ручной)

> 6 порядков (AutoScan)

4 порядка

> 6 порядков

Фактически системы семейства Odyssey – это совершенные инструменты для точного количественного анализа вестерн-блотов. Приборы семейства Odyssey характеризуются надежностью, простотой в использовании и гарантированно дают на выходе точные, надежные и воспроизводимые результаты. Системы Odyssey являются комплексным продуктом: взаимооптимизированные прибор, реагенты и программное обеспечение.

Инфракрасная система формирования изображений ODYSSEY CLx, Li-Cor Biotechnology

Инфракрасная система формирования изображений ODYSSEY Sa, Li-Cor Biotechnology

Двухрежимная система формирования изображений ODYSSEY Fc, Li-Cor Biotechnology

Программное обеспечение LI-COR Image Studio

Система блоттинга LI-COR MPX